氰戊菊酯對Leydig細胞睪酮合成的影響及其機制

【摘要】：[摘要] 目的 探討氰戊菊酯(Fen)對睪丸Leydig細胞睪酮合成的影響及其機制。方法采用差速貼壁法分離提純SD大鼠睪丸Leydig細胞。用0、25、50和100 μmol/LFen處理Leydig細胞1、12和24h，采用ELISA法檢測睪酮水平。設置空白對照組(加入0.1%DMSO處理)、Fen暴露組(加入100μmol/LFen處理)、Fen+NAC組(加入100μmol/LFen和5mmol/LNAC處理)、Fen+CsA組(加入100μmol/LFen和2mmol/LCsA處理)，給藥后繼續培養24h。采用流式細胞儀檢測活性氧(ROS)和線粒體膜電位變化，ELISA法檢測睪酮水平及谷胱甘肽(GSH)、cAMP含量，化學發光法檢測ATP含量，Westernblotting檢測超氧化物歧化酶(SOD)、類固醇激素合成急性調節蛋白(StAR)、3β-羥類固醇脫氫酶(3β-HSD)和細胞色素P450膽固醇側鏈裂解酶(CYP11A1)的表達。結果 選擇100 μmol/LFen處理24h進行實驗。與空白對照組比較，Fen暴露組Leydig細胞睪酮合成水平，GSH、SOD、ATP、cAMP含量，線粒體膜電位，以及StAR、3β-HSD、CYP11A1蛋白相對表達量明顯降低(P0.01)，ROS含量明顯升高(P0.05或P0.01)；與Fen暴露組比較，Fen+NAC組、Fen+CsA組Leydig細胞睪酮合成水平，GSH、SOD、ATP、cAMP含量，線粒體膜電位，以及StAR、3β-HSD、CYP11A1蛋白相對表達量明顯升高(P0.05或P0.01)，ROS含量明顯降低(P0.01)。結論 Fen可能通過誘導氧化應激引起Leydig細胞線粒體損傷，致使ATP和cAMP合成受阻，從而抑制cAMP/PKA信號通路依賴性的睪酮合成相關蛋白和酶的表達，最終導致Leydig細胞睪酮合成障礙。